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商品介紹:
測定意義: GCS(EC 2.4.1.11)催化UDPG和葡萄糖殘基生成糖原和UTP,以α-1,4-糖苷鍵相連延長糖鏈,是肝和肌肉糖原合成酶的限速酶,是胰島素作用的主要靶酶,對糖代謝的調節和血糖穩態的維持具有重要作用。 測定原理: GCS催化UDPG和葡萄糖殘基生成糖原和UTP,丙酮酸激酶和乳酸脫氫酶進一步依次催化NADH氧化生成NAD+,在340nm下測定NADH下降速率,即可反映GCS活性。 需自備的儀器和用品: 分光光度計/酶標儀、臺式離心機、可調式移液器、1mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。 |
提取液:液體 100 mL×1 瓶,4℃保存。
試劑一:液體 5 mL×1 瓶,4℃避光保存。
試劑二:液體 15 mL×1 瓶,4℃保存。
試劑三:液體 3 mL×1 瓶,4℃保存。
試劑四:液體 3 mL×1 瓶,4℃保存。
本試劑盒僅供研究使用公司實驗室提供免費代測,7個工作日出結果,提供原始數據!
產品名稱 | 規格 | 檢測方法 | 貨號 |
糖原合成酶(GCS)測試盒紫外分光光度法 | 50管/48樣 | 紫外分光光度法 | BK-01S6981 |
實驗結果判斷我有妙招:
1、定量測定結果根據標準曲線計算樣品中待測物的含量。
2、以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結果的閾值。
3、以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性,P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑,P/N小于1.5為陰性。
4、ELISA試劑盒目測定性法:加入底物經酶解和終止反應后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照,與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
與您分享常用不穩定試劑的分類及要求:
① 易揮發、低燃點的試劑要密封,放于陰涼、通風、遠離火源處保存。
② 與水蒸氣,水發生反應的物質要密封,并遠離水源保存。
③ 易與氧氣作用的試劑,應將其固體或晶體密封保存,不宜長期存放其水溶液,亞硫酸,氫硫酸溶液要密封存放,鉀,鈉,白磷更要采用液封形式。
④ 與二氧化碳反應的物質要密封保存,其相應的溶液較固體更易反應,所以更要注意密封保存。
⑤ 易揮發或自身分解的試劑要密封,放于陰涼通風處保存。
操作步驟:
1. 樣品的準備:
a. 細胞樣品的準備:收集細胞,用4 ℃或冰浴預冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預冷組織細胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心,取上清作為待測樣品。
b. 組織樣品的準備:動物用生理鹽水(0.9% NaCl ,含有0.16mg/ml) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細胞裂解液比例, 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心,取上清作為待測樣品。
d. 使用BCA蛋白濃度測定試劑盒(P1511)測定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個活力單位左右(不同細胞和組織的差異會比較大,該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準備20-100 ug蛋白量通常已經足夠用于后續檢測。
e. 根據蛋白濃度和預計的蛋白使用量,用試劑盒提供的SOD檢測緩沖液適當稀釋樣品。例如,小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準備好的樣品如果當天測定,可以冰浴保存;如果當天不能完成測定,可以-70 ℃凍存,但建議盡量當天完成測定。
2. 試劑盒的準備工作:
a. WST-8酶工作液的配制: 參照下表,根據待檢測樣品(包括標準品) 數量,配制適量WST-8酶工作液,配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存,可當天使用,但建議盡量現配現用。
注意:由于酶溶液的用量較少且易沉降,必須注意在使用前先輕輕離心一下,然后適當混勻后再使用。
b. 反應啟動工作液配制:將試劑盒提供的反應啟動液 (40X) 溶解后混勻,按1μl 反應啟動液(40X) 加入39μl SOD 檢測緩沖液的比例進行稀釋,即為反應啟動工作液。4℃或冰浴保存,可當天使用,但建議盡量現配現用。
c. (可選做) SOD 標準品準備:需自備SOD標準品,用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標準品稀釋至如下系列濃度:20U/ml,10U/ml ,5U/ml,2.5U/ml,1.25U/ml,0.625U/ml。在隨后的檢測中可以各取20微升,參考樣品進行檢測。說明:為避免稀釋后SOD酶活性的下降, SOD標準品宜現稀釋現使用;本試劑盒對于SOD的檢測并不需要SOD作為標準品,但可以使用SOD標準品作為陽性對照或作為對SOD活性定量的參考。
500 mL McCoy's 5A(含1%雙抗+10%小牛血清) Cell Culture Medium -20℃保存
500mL Acrylamide: Bis-acrylamide Solution(丙烯酰胺-甲叉雙丙烯酰胺溶液),29:1 Acrylamide: Bis-acrylamide Solution,29:1 常溫保存
2500mL TAE電泳液,50× TAE Buffer, 50× 常溫
2 ug pGAS-TA-Luc pGAS-TA-Luc 低溫運輸,-20℃保存
50次 柱式質粒 DNAout Column Plasmid DNAOUT 常溫保存(RNase A溶液4℃保存)
1瓶 CNE細胞株 CNE 低溫運輸和保存
結晶紫中性紅膽鹽瓊脂平板(9cm) Violet Red Bile Agar 10個/包
50U 切刻 Uracile Nicking Enzyme -20℃保存
100mL PIPES Buffer,0.5M, pH6.5 PIPES Buffer,0.5M, pH6.5 常溫保存
10管 穿刺 Stab Medium 4℃保存
2 ug pPIC 6C pPIC 6C 低溫運輸,-20℃保存
糖原合成酶(GCS)測試盒紫外分光光度法WASF3 Verprolin同源結構域包含蛋白3抗體 規格: 0.2ml
Rabbit Anti-Guinea pig IgG/HRP 辣根過氧化物標記的兔抗豚鼠IgG 規格: 0.1ml
Cathepsin H/CTSH 組織蛋白H抗體 規格: 0.1ml
BAGE3 瘤/睪抗原2.3抗體 規格: 0.2ml
NKG2C NK細胞受體2C抗體 規格: 0.2ml
BACH1/BRIP1 易基因相互作用蛋白1抗體 規格: 0.1ml
IL-17D/IL-27 白介素-17D抗體 規格: 0.1ml
ECP 嗜酸性粒細胞陽離子蛋白抗體 規格: 0.1ml
COMTD1/AVSD2 富含半胱與表皮生因子樣蛋白2抗體 規格: 0.2ml
DBC2 基因刪除蛋白2抗體 規格: 0.2ml
Rabbit Anti-human IgM/Alexa Fluor 647 Alexa Fluor 647標記的兔抗人IgM 規格: 0.1ml
CDAN1 先天性紅細胞生成異常性貧蛋白1抗體 規格: 0.2ml
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