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實驗方法學:
一、肝素的配制:
市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些??梢匀?.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。
肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉動,每隔5~10分鐘轉動一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。
二、血液樣本的收集:
全血根據收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時,不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。
1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時,直接低速離心分離出血清待用或保存。
2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實驗室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及。
選擇抗凝的注意點:
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時可能會出現絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后
用于測定。
特別提醒:本產品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測。
產品名稱:葡萄糖6磷酸酶(G6P)測試盒微量法
產品規格:100管/96樣
檢測方法:微量法
產品貨號:BK-01S6974
產品分類:糖異生系列
商品介紹:
測定意義: 葡萄糖-6-磷酸酶((glucose 6 phosphatase,G6Pase,EC 3.1.3.9)廣泛存在于動物、植物、微生物和細胞中,是糖異生過程水解葡萄糖-6-磷酸生成葡萄糖的限制酶,在保證血糖的動態平衡方面起著重要的作用。 測定原理: G6P催化葡萄糖-6-磷酸生成葡萄糖,變旋酶和葡萄糖脫氫酶進一步依次催化NAD+還原生成NADH,在340nm下測定NADH生成速率,即可反映G6P活性。 需自備的儀器和用品: 分光光度計/酶標儀、臺式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。 |
所需的儀器和用品:
可見分光光度計、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、低溫離心機、移液器、研缽、冰和蒸餾水
四、超氧化物歧化酶(SOD)的測定:
建議正式實驗前選取 2 個樣本做預測定,了解本批樣品情況,熟悉實驗流程,避免實驗
樣本和試劑浪費!
1、樣本制備
① 組織樣本: 取約 0.1g 組織(水分充足的樣本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4oC 或冰浴進行 勻漿(或使用各類常見勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min,取上清作為待測液。 【注】:若增加樣本量,可按照組織質量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例進行提取
| ② 細菌/細胞樣本: 先收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;取約 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液,超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復 30 次); 12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。 【注】:若增加樣本量,可按照細菌/細胞數量(10 4):提取液(mL)為 500~1000:1 的比例進行提取。 ③ 液體樣本:直接檢測;若渾濁,離心后取上清檢測。 |
注意事項:
1、試劑二為酶,不可冷凍,使用時在冰上放置。
2、對照管只需要做一管。
3、若對照管吸光值大于2,建議將試劑二用蒸餾水稀釋7倍后使用(10μl試劑二原液+60μl蒸餾水)。
4、SOD為什么有的樣本測定管大于對照管,對照管數值在什么范圍?
對照管的范圍是0.8-2。對照管吸光值過低可能是(1)試劑二或試劑四沒有現配現用;(2)沒有按順序加試劑;(3)反應時間不夠,可以延長反應時間(反應時間30min可以延長到40min)。對照管吸光值過高可能是試劑二未按操作說明書稀釋相應倍數。
若出現測定管大于對照管,可能是樣本中雜質的影響太大,為了降低雜質的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測,通??梢允箿y定正常。計算公式中乘以相應稀釋倍數。
2 ug pGL3-control pGL3-control 低溫運輸,-20℃保存
肉湯D Broth medium D (Lactose monohydrate broth) 250g
1瓶 Hep G2[HepG2]細胞株 Hep G2[HepG2] 低溫運輸和保存
三糖鐵(TSI)瓊脂 TSI Agar 250g
0.032µg 腸激(輕鏈) Enterokinase,Light Chain -20℃保存
125mL RNase-Free TE Buffer(無RNase的TE緩沖液),20X,pH8.0 RNase-Free TE Buffer,20X,pH8.0 常溫保存
1 管 K802大腸桿菌 K802 E.coli Strain -80℃保存
2 ug pRNAT-H1.1/Hygro pRNAT-H1.1/Hygro 低溫運輸,-20℃保存
24 T 乳酸脫氫測試盒 Oxidative Stress Detection Kit 常溫保存
2 ug pcDNA3-CFP pcDNA3-CFP 低溫運輸,-20℃保存
察氏液體 250g
葡萄糖6磷酸酶(G6P)測試盒微量法Phospho-PRAS40 (Thr246) 磷酸化蛋白激AKT底物1抗體 規格: 0.1ml
DPP2 溶體絲蛋白DPP2抗體 規格: 0.1ml
CHK1/CHEK1 細胞周期檢測點激1抗體 規格: 0.2ml
Mouse Anti-rabbit IgG/Cy3 Cy3標記的小鼠抗兔IgG 規格: 0.1ml
phospho-ATRIP (Ser68+Ser72) 系統性紅斑狼瘡先關蛋白TREX1抗體 規格: 0.1ml
MUL1/RNF218 E3泛素連接MUL1抗體 規格: 0.2ml
phospho-ROCK2(Tyr256) 磷酸化Rho相關蛋白激2抗體 規格: 0.1ml
AHNAK2 AHNAK核蛋白2抗體 規格: 0.2ml
Phospho-NFKB1(Ser903) 磷酸化細胞核因子p50/k基因結合核因子抗體 規格: 0.1ml
E2EPF 泛素交聯抗體 規格: 0.2ml
CADM3/IGSF4B 細胞粘附分子3抗體 規格: 0.2ml
Rabbit Anti-Bov IgG/RBITC 羅丹明標記的兔抗牛IgG 規格: 0.3ml
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