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特別提醒:本產品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測。
產品名稱:土壤多酚氧化酶(SPPO)測試盒微量法
產品規格:100管/96樣
檢測方法:微量法
產品貨號:BK-01S6820
產品分類:土壤系列
商品介紹:
測定意義: S-PPO主要來源于土壤微生物、植物根系分泌物及動植物殘體分解釋放,催化土壤中芳香族化合物氧化成醌,醌與土壤中蛋白質、氨基酸、糖類、礦物等物質反應生成有機質和色素,完成土壤芳香族化合物循環,用于土壤環境修復。 測定原理: S-PPO能夠催化鄰苯三酚產生紫色物質,后者在430nm有特征光吸收。 自備用品: 可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、25mL(不允許快遞)、研缽、冰和蒸餾水。 |
所需的儀器和用品:
可見分光光度計、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、低溫離心機、移液器、研缽、冰和蒸餾水
四、超氧化物歧化酶(SOD)的測定:
建議正式實驗前選取 2 個樣本做預測定,了解本批樣品情況,熟悉實驗流程,避免實驗
樣本和試劑浪費!
1、樣本制備
① 組織樣本: 取約 0.1g 組織(水分充足的樣本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4oC 或冰浴進行 勻漿(或使用各類常見勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min,取上清作為待測液。 【注】:若增加樣本量,可按照組織質量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例進行提取
| ② 細菌/細胞樣本: 先收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;取約 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液,超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復 30 次); 12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。 【注】:若增加樣本量,可按照細菌/細胞數量(10 4):提取液(mL)為 500~1000:1 的比例進行提取。 ③ 液體樣本:直接檢測;若渾濁,離心后取上清檢測。 |
實驗方法學:
一、肝素的配制:
市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些??梢匀?.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。
肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉動,每隔5~10分鐘轉動一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。
二、血液樣本的收集:
全血根據收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時,不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。
1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時,直接低速離心分離出血清待用或保存。
2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實驗室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及。
選擇抗凝的注意點:
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時可能會出現絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后
用于測定。
2 ug PT2/RMCE-puDTK PT2/RMCE-puDTK 低溫運輸,-20℃保存
李氏菌增菌肉湯(LB1,LB2)基礎 Listeria Enrichment Broth Base 250g
5u 氧化 Xanthine Oxidase 4℃保存
50T 轉基因植物TETR基因PCR檢測試劑盒 低溫運輸,-20℃保存
50 T 肽一還原測試盒 Oxidative Stress Detection Kit 常溫保存
250mL Maleate Buffer(馬來酸緩沖液),0.2M,pH6.5 Maleate Buffer,0.2M,pH6.5 常溫保存
25OD G(5′)ppp(5′)G 帽結構類似物 RNA Cap Structure Analogs -20℃保存
2 ug pLVX-EF1α-mCherry-C1 pLVX-EF1α-mCherry-C1 低溫運輸,-20℃保存
改良GAM瓊脂 GAM Agar,Modified 250g
2 ug pKD3 pKD3 低溫運輸,-20℃保存
匹克氏肉湯基礎A Pick’s Broth BaseA 100g
土壤多酚氧化酶(SPPO)測試盒微量法Phospho-DBC1 (Thr454) 磷酸化膀胱缺失基因1抗體 規格: 0.1ml
Bone Sialoprotein/BSP 骨涎蛋白 0.1ml
Mouse Anti-Rabbit IgM/APC APC標記的小鼠抗兔IgM 規格: 0.1ml
GRP75 G蛋白偶聯受體75抗體 規格: 0.2ml
CACNA1A/Cav2.1 電壓依賴性鈣通道Cav2.1抗體 規格: 0.2ml
Goat Anti-Mouse IgM 羊抗小鼠IgM 規格: 1mg
Gab1 接蛋白Gab 1抗體 規格: 0.1ml
PEN2 早老素γ分泌2抗體 規格: 0.2ml
Rabbit Anti-rat IgM/Alexa Fluor 350 Alexa Fluor 350標記的兔抗大鼠IgM 規格: 0.1ml
TGF alpha 轉移生因子α抗體 規格: 0.1ml
ATAD3A/B/C 三磷酸苷家族蛋白3A抗體 規格: 0.2ml
GAS2L1 生停滯特異性蛋白2家族1抗體 規格: 0.2ml
注意事項:
1、試劑二為酶,不可冷凍,使用時在冰上放置。
2、對照管只需要做一管。
3、若對照管吸光值大于2,建議將試劑二用蒸餾水稀釋7倍后使用(10μl試劑二原液+60μl蒸餾水)。
4、SOD為什么有的樣本測定管大于對照管,對照管數值在什么范圍?
對照管的范圍是0.8-2。對照管吸光值過低可能是(1)試劑二或試劑四沒有現配現用;(2)沒有按順序加試劑;(3)反應時間不夠,可以延長反應時間(反應時間30min可以延長到40min)。對照管吸光值過高可能是試劑二未按操作說明書稀釋相應倍數。
若出現測定管大于對照管,可能是樣本中雜質的影響太大,為了降低雜質的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測,通??梢允箿y定正常。計算公式中乘以相應稀釋倍數。
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