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特別提醒:本產品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測。
產品名稱:亞硝酸還原酶(NiR)測試盒微量法
產品規格:100管/48樣
檢測方法:微量法
產品貨號:BK-01S6480
產品分類:氮代謝系列
商品介紹:
測定意義: 硝酸還原酶(NiR)是一類能催化亞硝酸鹽還原的酶,廣泛存在于微生物及植物體內,是自然界氮循環過程中的關鍵酶,可以將亞硝酸鹽降解為NO或NH3,從而減少環境中亞硝態氮的積累,降低因亞硝酸鹽累積而造成的對生物體的毒害作用。 測定原理 亞硝酸還原酶可將NO2—還原為NO,使樣品中參與重氮化反應生成紫紅色化合物的NO2—減少,即540nm處吸光值的變化可反應亞硝酸還原酶的活性。 需自備的儀器和用品 天平、研缽、可見分光光度計、水浴鍋、低溫離心機、1mL玻璃比色皿。 |
所需的儀器和用品:
可見分光光度計、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、低溫離心機、移液器、研缽、冰和蒸餾水
四、超氧化物歧化酶(SOD)的測定:
建議正式實驗前選取 2 個樣本做預測定,了解本批樣品情況,熟悉實驗流程,避免實驗
樣本和試劑浪費!
1、樣本制備
① 組織樣本: 取約 0.1g 組織(水分充足的樣本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4oC 或冰浴進行 勻漿(或使用各類常見勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min,取上清作為待測液。 【注】:若增加樣本量,可按照組織質量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例進行提取
| ② 細菌/細胞樣本: 先收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;取約 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液,超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復 30 次); 12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。 【注】:若增加樣本量,可按照細菌/細胞數量(10 4):提取液(mL)為 500~1000:1 的比例進行提取。 ③ 液體樣本:直接檢測;若渾濁,離心后取上清檢測。 |
實驗方法學:
一、肝素的配制:
市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些。可以取0.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。
肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉動,每隔5~10分鐘轉動一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。
二、血液樣本的收集:
全血根據收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時,不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。
1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時,直接低速離心分離出血清待用或保存。
2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實驗室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及。
選擇抗凝的注意點:
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時可能會出現絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后
用于測定。
50T 副豬嗜血桿菌定量PCR檢測試劑盒 低溫運輸,-20℃保存
V-P試劑盒 5ml*4
1瓶 Lec1細胞株 Lec1 低溫運輸和保存
改良麥康凱肉湯添加劑 Modified MacConkey Broth Additives 1ml*5支
100mg 膠原Ⅰ型 Collagenase TypeⅠ 4℃保存
250mL Stripping Buffer,4X Stripping Buffer,4X 常溫保存
100次 一步式胞漿蛋白微量制備試劑盒 One-Step Cytoplasmic Protein Miniprep Kit 4℃保存
2 ug pSIREN-RetroQ-ZsGreen pSIREN-RetroQ-ZsGreen 低溫運輸,-20℃保存
100mL Oligo(dT)再生溶液 Oligo (dT) Recharger 常溫避光保存
2 ug pCMV-SPORT6 FLJ21908 pCMV-SPORT6 FLJ21908 低溫運輸,-20℃保存
CHO培養基基礎 CHO Medium Base 250g
亞硝酸還原酶(NiR)測試盒微量法Phospho-Ret (Tyr905) 磷酸化指狀蛋白RET抗體 規格: 0.1ml
FAM161B FAM161B蛋白抗體 規格: 0.2ml
Phospho-BRCA1(Ser1524) 磷酸化易基因1抗體 規格: 0.1ml
HAUSP/USP7 皰疹毒相關泛素特異性蛋白7抗體 規格: 0.2mlTRAILR2/DR5/CD262 瘤細胞調亡素/死亡受體5抗體 規格: 0.1ml
GDN/SERPINE2 膠質源性連接蛋白抗體 規格: 0.2mlGPBB/PYGB 腦糖原磷酸化抗體 規格: 0.2ml
FBXL5 FBXL5蛋白抗體 規格: 0.2mlARSA 芳香基硫酸酯1抗體 規格: 0.2ml
RNASE4/Angiogenin 管生成素核糖核酸4抗體(肌萎性側索硬化癥蛋白) 規格: 0.1mlBcl2A1 BCL2相關蛋白A1抗體 規格: 0.1ml
DR3/APO3/TWEAK 死亡受體3抗體 規格: 0.1mlArfaptin 2 ADP核糖基化因子結合蛋白2抗體 規格: 0.2ml
ADAM11 去整合素樣金屬蛋白11抗體 0.2mlPAK1 p21激活激1抗體 規格: 0.1ml
Phospho-DARPP32(Thr34) 磷酸化多巴胺/cAMP調節神經磷蛋白抗體 規格: 0.1mlIKAROS 鋅指蛋白IKAROS抗體 規格: 0.2ml
Aurora A/ARK-1/AURKA 有絲分裂激A抗體 規格: 0.1mlKAT2B/ GCN5/PCAF 組蛋白乙酰轉移PCAF抗體 規格: 0.1ml
CK8 細胞角蛋白8抗體 規格: 0.1mlMAGEF1 黑色素瘤抗原F蛋白家族1抗體 規格: 0.2ml
注意事項:
1、試劑二為酶,不可冷凍,使用時在冰上放置。
2、對照管只需要做一管。
3、若對照管吸光值大于2,建議將試劑二用蒸餾水稀釋7倍后使用(10μl試劑二原液+60μl蒸餾水)。
4、SOD為什么有的樣本測定管大于對照管,對照管數值在什么范圍?
對照管的范圍是0.8-2。對照管吸光值過低可能是(1)試劑二或試劑四沒有現配現用;(2)沒有按順序加試劑;(3)反應時間不夠,可以延長反應時間(反應時間30min可以延長到40min)。對照管吸光值過高可能是試劑二未按操作說明書稀釋相應倍數。
若出現測定管大于對照管,可能是樣本中雜質的影響太大,為了降低雜質的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測,通??梢允箿y定正常。計算公式中乘以相應稀釋倍數。
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