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實驗方法學:
一、肝素的配制:
市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些??梢匀?.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。
肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉動,每隔5~10分鐘轉動一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。
二、血液樣本的收集:
全血根據收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時,不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。
1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時,直接低速離心分離出血清待用或保存。
2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實驗室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及。
選擇抗凝的注意點:
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時可能會出現絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后
用于測定。
特別提醒:本產品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測。
產品名稱:NO含量測試盒微量法
產品規格:100管/96樣
檢測方法:微量法
產品貨號:BK-01S6488
產品分類:氮代謝系列
商品介紹:
測定意義: NO(Nitric Oxide,NO)廣泛分布于生物體內神經、循環、呼吸、消化、泌尿生殖等系統中,特別是神經組織中較豐富。它作為細胞間及細胞內的信息物質,發揮信號傳遞的作用,是一種新型的生物信使分子,在機體的生理、病理過程中起著重要的作用。 測定原理: NO在體內或水溶液中極易氧化生成NO2—,在酸性條件下,NO2—與重氮鹽磺酸胺生成重氮化合物,進一步與萘基乙烯基二胺偶合,產物在550nm處有特征吸收峰,測定其吸光值,可以計算NO含量。為了排除樣品色素等的影響,每個樣品需做對照管。 自備實驗用品及儀器: 天平、研缽或勻漿器、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、蒸餾水。 |
所需的儀器和用品:
可見分光光度計、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、低溫離心機、移液器、研缽、冰和蒸餾水
四、超氧化物歧化酶(SOD)的測定:
建議正式實驗前選取 2 個樣本做預測定,了解本批樣品情況,熟悉實驗流程,避免實驗
樣本和試劑浪費!
1、樣本制備
① 組織樣本: 取約 0.1g 組織(水分充足的樣本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4oC 或冰浴進行 勻漿(或使用各類常見勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min,取上清作為待測液。 【注】:若增加樣本量,可按照組織質量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例進行提取
| ② 細菌/細胞樣本: 先收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;取約 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液,超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復 30 次); 12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。 【注】:若增加樣本量,可按照細菌/細胞數量(10 4):提取液(mL)為 500~1000:1 的比例進行提取。 ③ 液體樣本:直接檢測;若渾濁,離心后取上清檢測。 |
注意事項:
1、試劑二為酶,不可冷凍,使用時在冰上放置。
2、對照管只需要做一管。
3、若對照管吸光值大于2,建議將試劑二用蒸餾水稀釋7倍后使用(10μl試劑二原液+60μl蒸餾水)。
4、SOD為什么有的樣本測定管大于對照管,對照管數值在什么范圍?
對照管的范圍是0.8-2。對照管吸光值過低可能是(1)試劑二或試劑四沒有現配現用;(2)沒有按順序加試劑;(3)反應時間不夠,可以延長反應時間(反應時間30min可以延長到40min)。對照管吸光值過高可能是試劑二未按操作說明書稀釋相應倍數。
若出現測定管大于對照管,可能是樣本中雜質的影響太大,為了降低雜質的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測,通常可以使測定正常。計算公式中乘以相應稀釋倍數。
1 管 GV3101農桿菌 GV3101 Agrobacterium Strain -80℃保存
2 ug pSilencer 2.1-U6 hygro pSilencer 2.1-U6 hygro 低溫運輸,-20℃保存
5次 97孔板病毒RNAout(離心法) 97 Microwell Plate Vrial RNAOUT 4℃保存
2 ug pCMV-Flag-3 pCMV-Flag-3 低溫運輸,-20℃保存
培養基 Glycine Medium 250g
1g G 鈉鹽 Penicillin G Sodium Salt 室溫保存
50T 人肥胖易感基因825T PCR測定試劑盒 低溫運輸,-20℃保存
2 mg BAY 11-7082(NF-κB抑制劑) Cell Apoptosis Inducer and Inhibitor -20℃保存
100mL CHES Buffer,0.5M,pH9.5 CHES Buffer,0.5M,pH9.5 常溫保存
5次 TdT加尾法DNA標記試劑盒 TdT-Tailing DNA Labeling Kit Series -20℃保存
2 ug phMGFP phMGFP 低溫運輸,-20℃保存
NO含量測試盒微量法ZDHHC21 γ-氨基丁酸A受體相關膜蛋白3 規格: 0.2ml
YES1 原基因酪蛋白激Yes1抗體 規格: 0.1ml
PKC beta 1/2 蛋白激C beta 1/2抗體 規格: 0.1ml
KLK4 激肽釋放4抗體 規格: 0.1ml
C3orf39 3號染色體開放閱讀框39抗體 規格: 0.2ml
CCDC116 卷曲螺旋結構域蛋白116抗體 規格: 0.2ml
phospho-IRS-1(Ser307) 磷酸化胰島素受體底物p-IRS-1/2抗體 規格: 0.1ml
Claudin 8 緊密連接蛋白8抗體 規格: 0.2ml
c-Abl/Abl1 非受體酪激c-Abl抗體 0.1ml
Goat Anti-Mouse IgM/PE-Cy5.5 PE-Cy5.5標記的羊抗小鼠IgM 規格: 0.1ml
DLX4 DLX4抗體 規格: 0.2ml
Acetyl-Histone H4(K5) 乙酰化組蛋白H4抗體 0.1ml
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