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注意事項:
1、試劑二為酶,不可冷凍,使用時在冰上放置。
2、對照管只需要做一管。
3、若對照管吸光值大于2,建議將試劑二用蒸餾水稀釋7倍后使用(10μl試劑二原液+60μl蒸餾水)。
4、SOD為什么有的樣本測定管大于對照管,對照管數值在什么范圍?
對照管的范圍是0.8-2。對照管吸光值過低可能是(1)試劑二或試劑四沒有現配現用;(2)沒有按順序加試劑;(3)反應時間不夠,可以延長反應時間(反應時間30min可以延長到40min)。對照管吸光值過高可能是試劑二未按操作說明書稀釋相應倍數。
若出現測定管大于對照管,可能是樣本中雜質的影響太大,為了降低雜質的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測,通??梢允箿y定正常。計算公式中乘以相應稀釋倍數。
特別提醒:本產品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測。
產品名稱:二胺氧化酶(DAO)測試盒可見分光光度法
產品規格:50管/24樣
檢測方法:可見分光光度法
產品貨號:BK-01S6430
產品分類:氧化與抗氧化系列
商品介紹:
測定意義: DAO(EC1.4.3.6)廣泛存在于動物(腸粘膜、肺、肝臟、腎臟等)、植物和微生物中。催化多胺氧化為醛,其活性與核酸和蛋白合成密切相關,能夠反映腸道機械屏障的完整性和受損傷程度。 測定原理: DAO催化尸胺產生醛和過氧化氫,外源添加過量的辣根過氧化物酶,催化過氧化氫氧化鄰聯茴香胺生成有色物質,在460nm處有特征吸收峰,通過測定該波長吸光度增加速率,計算DAO活性。 自備實驗用品及儀器: 天平、低溫離心機、可見分光光度計/酶標儀、1 mL玻璃比色皿/96孔板、蒸餾水。 |
所需的儀器和用品:
可見分光光度計、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、低溫離心機、移液器、研缽、冰和蒸餾水
四、超氧化物歧化酶(SOD)的測定:
建議正式實驗前選取 2 個樣本做預測定,了解本批樣品情況,熟悉實驗流程,避免實驗
樣本和試劑浪費!
1、樣本制備
① 組織樣本: 取約 0.1g 組織(水分充足的樣本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4oC 或冰浴進行 勻漿(或使用各類常見勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min,取上清作為待測液。 【注】:若增加樣本量,可按照組織質量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例進行提取
| ② 細菌/細胞樣本: 先收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;取約 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液,超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復 30 次); 12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。 【注】:若增加樣本量,可按照細菌/細胞數量(10 4):提取液(mL)為 500~1000:1 的比例進行提取。 ③ 液體樣本:直接檢測;若渾濁,離心后取上清檢測。 |
實驗方法學:
一、肝素的配制:
市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些??梢匀?.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。
肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉動,每隔5~10分鐘轉動一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。
二、血液樣本的收集:
全血根據收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時,不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。
1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時,直接低速離心分離出血清待用或保存。
2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實驗室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及。
選擇抗凝的注意點:
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時可能會出現絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后
用于測定。
100mL Bicine Buffer,0.5M,pH7.4 Bicine Buffer,0.5M,pH7.4 常溫保存
革蘭氏陰性菌增菌液 Gram Negative Bacteria Enrichment Broth 250g
5g 雙 (2- ) 亞氨基三 ( 羥甲基 ) 甲烷 Bis-Tris 室溫干燥保存
500mL Tris-HCl Buffer,2.0M,pH7.5 Tris-HCl Buffer,2.0M,pH7.5 常溫保存
1mL 植物蛋白抑制劑 Protease Inhibitor for Plant -20℃保存
2 ug pTT5 pTT5 低溫運輸,-20℃保存
30次 凝固血液DNAout Blood Clot DNAOUT 常溫
2 ug pEF6/myc-His C pEF6/myc-His C 低溫運輸,-20℃保存
M17瓊脂 M17 Agar 250g
250mg 噻唑蘭 Thiazolyl Blue Tetrazolium Bromide(MTT) 4℃避光保存
96支 10 μL RNase-free白吸頭(盒裝已滅菌長尖) 常溫
二胺氧化酶(DAO)測試盒可見分光光度法Jun D 活化蛋白激D抗體 規格: 0.1mlRabbit Anti-Mink IgG/Alexa Fluor 555 Alexa Fluor 555標記的兔抗水貂IgG 規格: 0.1ml
Donkey Anti-Guinea pig IgG/Cy5.5 Cy5.5標記的驢抗豚鼠IgG 規格: 0.1mlFMDV Polyprotein (VP1 protein) 口蹄疫毒A型抗體 規格: 1ml
Rabbit Anti-human IgG F(ab')2 兔抗人IgG F(ab')2 規格: 1mgSOX10 轉錄因子SOX10抗體 規格: 0.2ml
AIF 調亡誘導因子抗體 規格: 0.1mlMAGEA2 黑色素瘤相關抗原2抗體 規格: 0.2ml
GATA6 GATA結合蛋白6抗體 規格: 0.1mlR Cadherin R Cadherin/CDH4 規格: 0.2ml
RND3/RHOE Rho家族GTP3抗體 規格: 0.1mlCDCA7 細胞分裂周期相關蛋白 規格: 0.2ml
eIF4G 真核翻譯起始因子4G抗體 規格: 0.1mlNIK/MAPKKK14 NFkB誘導激抗體 規格: 0.1ml
CT-1/CTF1 心肌營養素1抗體 規格: 0.1mlNRH2 死亡結構域蛋白NRH2抗體 規格: 0.2ml
Rabbit Anti-Goat IgG/PE-CY5 PE-CY5標記的兔抗羊IgG 規格: 0.1mlInsulin Receptor R 胰島素受體相關受體抗體 規格: 0.2ml
RP1/DCDC4A 視網膜色素變性蛋白1抗體 規格: 0.2mlPCSK9/NARC1 神經細胞凋亡調節轉化蛋白1抗體(前蛋白轉化枯草溶菌素9) 規格: 0.1ml
StAR/StARD1 促黃體激素誘導蛋白抗體 規格: 0.2mlCNOT6 細胞表面趨化因子受體4相關蛋白6抗體 規格: 0.2ml
BCAS3 相關蛋白3抗體 規格: 0.1mlPAFAH1B3/PAFAHG 小板衍化生因子γ抗體 規格: 0.2ml
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