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本試劑盒僅供研究使用公司實驗室提供免費代測,7個工作日出結果,提供原始數據!
產品名稱 | 規格 | 檢測方法 | 貨號 |
乳酸脫氫酶(LDH)測試盒微量法 | 100管/48樣 | 微量法 | BK-01S6325 |
商品介紹:
測定意義 測定意義: LDH(EC 1.1.1.27)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中,是糖酵解途徑的末端酶,催化丙酮酸與乳酸之間的可逆反應,伴隨著NAD+/NADH之間互變。 測定原理: LDH催化NAD+氧化乳酸生成丙酮酸,丙酮酸進一步與2, 4 - 二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙,在堿性溶液中顯棕紅色,顏色深淺與丙酮酸濃度成正比。 需自備的儀器和用品: 可見分光光度計/酶標儀、恒溫水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。 |
試劑組成和配制:
提取液:液體 100 mL×1 瓶,4℃保存。
試劑一:液體 5 mL×1 瓶,4℃避光保存。
試劑二:液體 15 mL×1 瓶,4℃保存。
試劑三:液體 3 mL×1 瓶,4℃保存。
試劑四:液體 3 mL×1 瓶,4℃保存。
實驗結果判斷我有妙招:
1、定量測定結果根據標準曲線計算樣品中待測物的含量。
2、以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結果的閾值。
3、以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性,P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑,P/N小于1.5為陰性。
4、ELISA試劑盒目測定性法:加入底物經酶解和終止反應后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照,與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
與您分享常用不穩定試劑的分類及要求:
① 易揮發、低燃點的試劑要密封,放于陰涼、通風、遠離火源處保存。
② 與水蒸氣,水發生反應的物質要密封,并遠離水源保存。
③ 易與氧氣作用的試劑,應將其固體或晶體密封保存,不宜長期存放其水溶液,亞硫酸,氫硫酸溶液要密封存放,鉀,鈉,白磷更要采用液封形式。
④ 與二氧化碳反應的物質要密封保存,其相應的溶液較固體更易反應,所以更要注意密封保存。
⑤ 易揮發或自身分解的試劑要密封,放于陰涼通風處保存。
操作步驟:
1. 樣品的準備:
a. 細胞樣品的準備:收集細胞,用4 ℃或冰浴預冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預冷組織細胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心,取上清作為待測樣品。
b. 組織樣品的準備:動物用生理鹽水(0.9% NaCl ,含有0.16mg/ml) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細胞裂解液比例, 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心,取上清作為待測樣品。
d. 使用BCA蛋白濃度測定試劑盒(P1511)測定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個活力單位左右(不同細胞和組織的差異會比較大,該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準備20-100 ug蛋白量通常已經足夠用于后續檢測。
e. 根據蛋白濃度和預計的蛋白使用量,用試劑盒提供的SOD檢測緩沖液適當稀釋樣品。例如,小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準備好的樣品如果當天測定,可以冰浴保存;如果當天不能完成測定,可以-70 ℃凍存,但建議盡量當天完成測定。
2. 試劑盒的準備工作:
a. WST-8酶工作液的配制: 參照下表,根據待檢測樣品(包括標準品) 數量,配制適量WST-8酶工作液,配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存,可當天使用,但建議盡量現配現用。
注意:由于酶溶液的用量較少且易沉降,必須注意在使用前先輕輕離心一下,然后適當混勻后再使用。
b. 反應啟動工作液配制:將試劑盒提供的反應啟動液 (40X) 溶解后混勻,按1μl 反應啟動液(40X) 加入39μl SOD 檢測緩沖液的比例進行稀釋,即為反應啟動工作液。4℃或冰浴保存,可當天使用,但建議盡量現配現用。
c. (可選做) SOD 標準品準備:需自備SOD標準品,用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標準品稀釋至如下系列濃度:20U/ml,10U/ml ,5U/ml,2.5U/ml,1.25U/ml,0.625U/ml。在隨后的檢測中可以各取20微升,參考樣品進行檢測。說明:為避免稀釋后SOD酶活性的下降, SOD標準品宜現稀釋現使用;本試劑盒對于SOD的檢測并不需要SOD作為標準品,但可以使用SOD標準品作為陽性對照或作為對SOD活性定量的參考。
100次 肽還原檢測試劑盒 Oxidative Stress Detection Kit 常溫保存
250mL Maleate Buffer(馬來酸緩沖液),0.2M,pH6.0 Maleate Buffer,0.2M,pH6.0 常溫保存
25OD G(5′)ppp(5′)A 帽結構類似物 RNA Cap Structure Analogs -20℃保存
2 ug pLVX-EF1α-IRES-ZsGreen1 pLVX-EF1α-IRES-ZsGreen1 低溫運輸,-20℃保存
幽門螺旋桿菌固體培養基 Helicobacter Pylori Medium 250g
1瓶 PC 61 5.3 [PC 61; PC61.5.3]細胞株 PC 61 5.3 [PC 61; PC61.5.3] 低溫運輸和保存
葡萄糖肉浸液肉湯 Dextrose Meat Infusion Broth 250g
100g 纖維素 DE-52 Cellulose,DE-52 室溫干燥保存
50mL Zinc Acetate Solution(乙酸鋅溶液),100mM Zinc Acetate Solution,100mM 常溫保存
5g 脫氧膽酸鈉 Sodium Deoxycholate 常溫保存
2 ug pVillin-CRE pVillin-CRE 低溫運輸,-20℃保存
乳酸脫氫酶(LDH)測試盒微量法CMT/Icmt 異戊烯半胱羧基甲基轉移抗體 規格: 0.2ml
BAP31 BAP31蛋白抗體 規格: 0.1ml
glypican 1 磷脂酰基醇蛋白聚糖-1抗體 規格: 0.2ml
ORAV1 口腔高表達的蛋白1抗體 規格: 0.2ml
FGF16 成纖維細胞生因子16抗體 規格: 0.2ml
Mouse Anti-human IgG(3D3)/FITC FITC標記的鼠抗人IgG單克隆抗體 規格: 0.1ml
phospho-LCK(Tyr394) 磷酸化淋巴細胞特異性蛋白酪激抗體 規格: 0.1ml
Sin3b 轉錄抑制蛋白Sin3b抗體 規格: 0.2ml
phospho-PLB/phospholamban(phospho Ser16+Thr17) 磷酸化心臟磷蛋白抗體 規格: 0.1ml
GABR B3/GABA A Receptor beta 3 G氨基丁酸受體3抗體 規格: 0.2ml
PDK2 丙酮酸脫激亞型2抗體 規格: 0.2ml
BOb-1/POU2AF1 B細胞特異性轉錄因子抗體 規格: 0.1ml
特別提醒:本產品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測。
產品名稱:乳酸脫氫酶(LDH)測試盒微量法
產品規格:100管/48樣
檢測方法:微量法
產品貨號:BK-01S6325
產品分類:輔酶Ⅰ系列
商品介紹:
測定意義 測定意義: LDH(EC 1.1.1.27)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中,是糖酵解途徑的末端酶,催化丙酮酸與乳酸之間的可逆反應,伴隨著NAD+/NADH之間互變。 測定原理: LDH催化NAD+氧化乳酸生成丙酮酸,丙酮酸進一步與2, 4 - 二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙,在堿性溶液中顯棕紅色,顏色深淺與丙酮酸濃度成正比。 需自備的儀器和用品: 可見分光光度計/酶標儀、恒溫水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。 |
所需的儀器和用品:
可見分光光度計、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、低溫離心機、移液器、研缽、冰和蒸餾水
四、超氧化物歧化酶(SOD)的測定:
建議正式實驗前選取 2 個樣本做預測定,了解本批樣品情況,熟悉實驗流程,避免實驗
樣本和試劑浪費!
1、樣本制備
① 組織樣本: 取約 0.1g 組織(水分充足的樣本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4oC 或冰浴進行 勻漿(或使用各類常見勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min,取上清作為待測液。 【注】:若增加樣本量,可按照組織質量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例進行提取
| ② 細菌/細胞樣本: 先收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;取約 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液,超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復 30 次); 12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。 【注】:若增加樣本量,可按照細菌/細胞數量(10 4):提取液(mL)為 500~1000:1 的比例進行提取。 ③ 液體樣本:直接檢測;若渾濁,離心后取上清檢測。 |
實驗方法學:
一、肝素的配制:
市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些??梢匀?.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。
肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉動,每隔5~10分鐘轉動一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。
二、血液樣本的收集:
全血根據收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時,不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。
1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時,直接低速離心分離出血清待用或保存。
2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實驗室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及。
選擇抗凝的注意點:
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時可能會出現絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后
用于測定。
100次 肽還原檢測試劑盒 Oxidative Stress Detection Kit 常溫保存
250mL Maleate Buffer(馬來酸緩沖液),0.2M,pH6.0 Maleate Buffer,0.2M,pH6.0 常溫保存
25OD G(5′)ppp(5′)A 帽結構類似物 RNA Cap Structure Analogs -20℃保存
2 ug pLVX-EF1α-IRES-ZsGreen1 pLVX-EF1α-IRES-ZsGreen1 低溫運輸,-20℃保存
幽門螺旋桿菌固體培養基 Helicobacter Pylori Medium 250g
1瓶 PC 61 5.3 [PC 61; PC61.5.3]細胞株 PC 61 5.3 [PC 61; PC61.5.3] 低溫運輸和保存
葡萄糖肉浸液肉湯 Dextrose Meat Infusion Broth 250g
100g 纖維素 DE-52 Cellulose,DE-52 室溫干燥保存
50mL Zinc Acetate Solution(乙酸鋅溶液),100mM Zinc Acetate Solution,100mM 常溫保存
5g 脫氧膽酸鈉 Sodium Deoxycholate 常溫保存
2 ug pVillin-CRE pVillin-CRE 低溫運輸,-20℃保存
乳酸脫氫酶(LDH)測試盒微量法CMT/Icmt 異戊烯半胱羧基甲基轉移抗體 規格: 0.2ml
BAP31 BAP31蛋白抗體 規格: 0.1ml
glypican 1 磷脂?;嫉鞍拙厶?1抗體 規格: 0.2ml
ORAV1 口腔高表達的蛋白1抗體 規格: 0.2ml
FGF16 成纖維細胞生因子16抗體 規格: 0.2ml
Mouse Anti-human IgG(3D3)/FITC FITC標記的鼠抗人IgG單克隆抗體 規格: 0.1ml
phospho-LCK(Tyr394) 磷酸化淋巴細胞特異性蛋白酪激抗體 規格: 0.1ml
Sin3b 轉錄抑制蛋白Sin3b抗體 規格: 0.2ml
phospho-PLB/phospholamban(phospho Ser16+Thr17) 磷酸化心臟磷蛋白抗體 規格: 0.1ml
GABR B3/GABA A Receptor beta 3 G氨基丁酸受體3抗體 規格: 0.2ml
PDK2 丙酮酸脫激亞型2抗體 規格: 0.2ml
BOb-1/POU2AF1 B細胞特異性轉錄因子抗體 規格: 0.1ml
注意事項:
1、試劑二為酶,不可冷凍,使用時在冰上放置。
2、對照管只需要做一管。
3、若對照管吸光值大于2,建議將試劑二用蒸餾水稀釋7倍后使用(10μl試劑二原液+60μl蒸餾水)。
4、SOD為什么有的樣本測定管大于對照管,對照管數值在什么范圍?
對照管的范圍是0.8-2。對照管吸光值過低可能是(1)試劑二或試劑四沒有現配現用;(2)沒有按順序加試劑;(3)反應時間不夠,可以延長反應時間(反應時間30min可以延長到40min)。對照管吸光值過高可能是試劑二未按操作說明書稀釋相應倍數。
若出現測定管大于對照管,可能是樣本中雜質的影響太大,為了降低雜質的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測,通??梢允箿y定正常。計算公式中乘以相應稀釋倍數。
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